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HOME-耀世-「相信品牌的力量」

2023-01-06 16:05:36 yqs888 8

HOME-耀世-「相信品牌的力量」报道,荧光蛋白在生物学众多研究领域中有着广泛的应用, 基于荧光蛋白的分子探针和标记方法已成为细胞或体内动态成像研究生物大分子或细胞功能的重要工具。自1992年Shimomura 首次从水母 (Aequorea victoria) 中分离出绿色荧光蛋白 (green fluorescent protein,GFP),各种颜色的荧光蛋白被开发出,它们能特异地 “点亮”生物分子或细胞,并显示出生物分子的活动情况,从而能更有助于我们揭示这些分子或细胞的活动规律及本质。


除了绿色荧光蛋白外(GFP),研究人员基于GFP运用突变技术发现了多种颜色的荧光蛋白,并从珊瑚和海葵等物种中克隆出光谱红移的荧光蛋白,目前荧光蛋白按照颜色分类主要分为绿色系、蓝色系、青色系、黄色系、橙色系和红色系。

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如何选择荧光蛋白?


  • 激发峰/发射峰

每一种荧光蛋白都有其独特的激发波长和发射波长。因此,选择的荧光蛋白必须是所用成像系统能够激发和检测到的。对于单色实验,绿色荧光蛋白是最常用的,选择两种或以上荧光蛋白进行多色成像时,建议激发和峰值发射波长均相隔50-60nm以上。

对于两种颜色, EGFP+mCherry几乎在所有荧光显微镜和流式细胞仪上都能正常工作;对于三种颜色,蓝色、绿色和红色荧光蛋白组合(如TagBFP + EGFP + mCherry)或青色、黄色和红色组合(例如CyPet + YPet + mCherry)可以很好的一起配合工作。

荧光蛋白应用于活体成像实验时,尽量选择红色或近红外的荧光蛋白,这类荧光蛋白的发射波长较长,具有更好的组织穿透能力。


  • 单体性质

将荧光蛋白与目标蛋白进行融合表达,直接地追踪目标蛋白或是定位目标蛋白,多聚体可能会影响融合蛋白的生物学功能或定位,应尽量选择单体。


  • PK值

每个荧光蛋白都有其最合适的 pH 值,即在一定的pH 值下,荧光强度最高。有的荧光蛋白适合在酸性环境下使用,相反有的适合在碱性环境下使用,因此在选择荧光蛋白时需要考虑荧光蛋白的 PK 值。

在细胞内,大多数细胞器内及细胞质的 pH 值都在 7.0 左右,然而溶酶体内的 pH 值就比较低,mCherry的 PK值比较低,可以用于标记溶酶体内的蛋白。

在选择荧光蛋白时,要考虑目标蛋白定位环境的 pH 值,再考虑使用相应 PK 值的荧光蛋白。


  • 亮度

荧光蛋白的亮度值由消光系数与量子产率的乘积计算得出。在许多情况下,将荧光蛋白的亮度与EGFP(设定为1)进行比较(见上表),应选择足够亮的荧光蛋白便于检测和成像。